实验室一般溶液的配置方法

配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同，现举两个例子：

举例1：配置0.05mol/L，400mL NaOH溶液的步骤：

要准确配置氢氧化钠的浓度，则要用容量瓶定容，实验室没有400毫升的容量瓶，则选用500毫升的容量瓶。

1.计算需要氢氧化钠的质量：

0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000克

2.称1.000克氢氧化钠于烧杯中，加少量水溶解，然后倒入500毫升容量瓶里，分3次洗烧杯，将溶液全部倒入容量瓶里，最后用水稀释至刻度线，摇匀，即，得到0.05mol/L的氢氧化钠溶液。

如果不需要很准确的话，可以直接用量筒量400毫升，称的时候只要称0.8克就可以了。

举例2：配置1.5mol/L的稀硫酸200mL步骤：

第1步：计算：根据C1V1=C2V2，计算需要浓硫酸的体积;

第2步：量取，利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积;

第3步：稀释，将浓硫酸转移到小烧杯中，加少量水稀释;

第4步：转移,待溶液温度降低后，将烧杯中的硫酸转移到200mL容量瓶中;

第5步：洗涤，洗涤小烧杯，和转移的时候用到的玻璃棒，至少三次，将洗涤的水一并转移到容量瓶中;

第6步：定容，加水定容到刻度线，在距离刻度线一厘米左右改用胶头滴管定容;

第7步：摇匀,将溶液摇匀,如果液面下降也不可再加水定容;

第8步：将配得的溶液转移至试剂瓶中，贴好标签;

举例3：配制500mL，0.1mol/L碳酸钠溶液步骤及注意事项

所需的仪器：烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒

步骤：

__步：计算：所需碳酸钠的质量=0.5*0.1*106=5.3克;

第二步：称量：在天平上称量5.3克碳酸钠固体，并将它倒入小烧杯中;

第三步：溶解：在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使其溶解;

第四步：移液：将溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中;

第五步：洗涤：用蒸馏水洗烧杯2～3次，并倒入容量瓶中;

第六步：定容：倒水至刻度线1～2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直;

第七步：摇匀：盖好瓶塞，上下颠倒、摇匀;

第八步：装瓶、贴签;

误差分析：

固体药品的称量与液体药品的量取是否准确;

把溶液向容量瓶中转移，溶液洒了;

未洗涤烧杯和玻璃棒;

用待配液润洗了容量瓶;

定容时水加多了或加少了;

定容时未平视刻度线。

仰视、俯视对溶液浓度有何影响?

★俯视刻度线，实际加水量未到刻度线，使溶液的物质的量浓度增大;

★仰视刻度线，实际加水量超过刻度线，使溶液的物质的量浓度减小。

市售盐酸密度1.19，质量分数36%～38%

以37%计算：

步骤：

1.计算：

假若需要2mol/L的硫酸100mL，则需37%浓硫酸16.6mL;

计算过程如下：假设盐酸VmL：

(0.1L*2mol/L*36.5g/mol)/37%=V/1.19

V=16.59mL,考虑到量筒的精确度0.1mL，故取16.6m

L即可。

2.量取：

16.6mL浓硫酸;

3.溶解：

把16.6mL浓硫酸倒入已经加入蒸馏水的小烧杯中，用玻璃棒不断搅拌。

4.转移：

待溶液冷却后，将溶液沿玻璃棒倒入100毫升的容量瓶中。

5.洗涤：

再用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次，并将全部洗液移入容量瓶中。

6.定容：

向容量瓶内加蒸馏水，当液面接近刻度线1-2厘米处时，改用滴管滴加蒸馏水到一面恰好与刻度线相切。

7.摇匀：

塞上瓶塞，反复颠倒容量瓶数次，使瓶内的溶液均匀，此时可以把溶液倒入到试剂瓶中贴标签保存。完成配制过程

容量瓶的使用六忌：

1.忌用容量瓶进行溶解(体积不准确)

2.忌直接往容量瓶倒液(洒到外面)

3.忌加水超过刻度线(浓度偏低)

4.忌读数仰视或俯视(仰视浓度偏低，俯视浓度偏高)

5.忌不洗涤玻璃棒和烧杯(浓度偏低)

6.忌标准液存放于容量瓶(容量瓶是量器，不是容器)

1 mol/L的氢氧化钠溶液250mL，完成下列步骤：

①用天平称取氢氧化钠固体/克。

②将称好的氢氧化钠固体放入烧杯中加少量蒸馏水将其溶解，待完全溶解后将溶液沿玻璃棒移入250mL的容量瓶中。

③用少量蒸馏水冲洗2～3次，将冲洗液移入容量瓶中，在操作过程中不能损失点滴液体，否则会使溶液的浓度偏低。

④向容量瓶内加水至刻度线1～2cm时，改用胶头滴管小心地加水至溶液凹液面与刻度线相切，若加水超过刻度线，会造成溶液浓度偏低应该重新配制。

⑤最后盖好瓶盖，摇匀，将配好的溶液移入试剂瓶中贴好标签。

常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺(Spermidine)：

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10mL。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine)：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10mL。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate)：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/mL牛血清蛋白(BSA)：

加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶)于9.5mL水中(为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇(DTT)：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4mL水，分成小份贮存于-20℃，或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65mL的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾(potassiumacetate)：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100mL。

1mol/L氯化钾(KCl)：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100mL。

3mol/L乙酸钠(sodiumacetate)：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90mL水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100mL。

0.5mol/L EDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L)，混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：

将23.8gHEPES溶于约90mL的水中，用NaOH调pH(6.8～8.2)，然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：

溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100mL。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/mL蛋白酶K(proteinase K)：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5mL水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mL R-nase(无D-Nase)(D-Nase-freeR-Nase)：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1mL的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)

5mol/L氯化钠(NaCl)：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100mL。

10N氢氧化钠(NaOH)：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌)，氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10%SDS(十二烷基硫酸钠)：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol)：

溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100mL。

100%三氯乙酸(TCA)：

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100mL水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)

2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)：

溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF)，用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂(Denhardt'sregent)

依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNA ligase buffer)(粘端、平端连接)

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，—80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液

20%PEG8000/2.5M NaCl

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100mL，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水

加100μL DEPC 于100mL水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h，然后在15psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺(deionized formamide)

直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。

磷酸缓冲液(phosphate buffer)

按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液：溶解142g于足量水中使终体积为1L。

电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液

5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液

染料

1%溴酚蓝(bromophenolblue)

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumbromide)

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液(gel loading solutions)

6×碱性凝胶上样液(室温贮存)

6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)

6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)